I. グリッド選択
尿沈渣の計数では、通常、4 つの大きなコーナー グリッドまたは 1 つの大きな中央グリッドを使用します (細胞/円柱の数に応じて調整されます。細胞数が多い場合は 4 つのコーナー グリッド、細胞数が少ない場合は 1 つの大きな中央グリッド)。
検体の準備と計数前処理
標本収集:
通常、新鮮な朝の尿(高濃度、高陽性率)または随時尿を採取し、10 mL の尿を遠心管に入れます。
遠心分離濃縮: 標準操作手順に従って、1500 rpm で 5 分間遠心分離します。
上清を捨てる: 上清を慎重に捨て、底部の 0.2 mL の沈殿物を残します (50 倍濃度、濃縮係数 = 元の尿量 / 沈殿物量 = 10 / 0.2 = 50)。
沈殿物の再懸濁: 遠心管を軽く振って沈殿物を均等に分散させ、細胞の凝集を防ぎます。
カウント手順: サンプルの追加: マイクロピペットを使用して混合尿沈殿物を吸い上げ、気泡を避けながらカウントチャンバーのカバーガラスの端に追加します (毛細管現象を使用してカウントチャンバーを満たします) (気泡があると、カウント領域の容量が不正確になります)。
沈殿: カウントチャンバーをステージ上に置き、形成された要素がカウントチャンバーの底に沈殿するまで 1 ~ 2 分間放置します。これにより、カウント中に浮遊細胞によって発生するエラーを回避できます。
顕微鏡観察: 低倍率 (10 倍) の顕微鏡を使用して計数室の位置を特定し、高倍率 (40 倍) で計数します。
カウントの原則:重複や漏れを避けるため、「上は数えるが下は数えない、左は数えるが右は数えない」という原則(隣接する辺と線の角にある細胞のみを数える)に従ってください。カウント領域の選択:赤血球、白血球などの数が多い成分の場合:四隅の四角形にあるすべての対象成分をカウントします。
鋳造数が少ないコンポーネントなどの場合: 計数室の 9 つの大きなマス目すべてで、すべての対象コンポーネントを計数します。
コア計算方法:尿沈渣計数
この計算は、「計数エリア内の実際の量」を「尿中の成分の元々の濃度」に変換します。この式では、計数エリアの容積とサンプルの濃縮係数を考慮する必要があります。
一般的な計算式:
具体的な計算例(例としてコーナーセル4つを数える)
尿成分濃度(細胞数/μL)=(総計数数×濃縮係数)/計数領域の総容積(μL)
1. パラメータを決定する:
計数領域: 4 つの大きな細胞、それぞれの大きな細胞の体積 = 0.1 μL なので、4 つの大きな細胞の合計体積 = 4 × 0.1 = 0.4 μL。
濃縮係数: 10mLの尿を遠心分離した後、0.2mLの沈殿物が保持され、濃縮係数 = 10/0.2 = 50。
実際の数: 4 つのコーナーセルに合計 80 個の白血球がカウントされていると想定します。
白血球濃度(細胞/μL)= 80 × 50 / 0.4 = 10000細胞/μL
小さな細胞を数えるケース(大きな細胞を9個数える)
9 個の大きな細胞を計数する場合(例:キャスト計数)、「計数領域の総容量 = 9 × 0.1 = 0.9μL」となり、他のパラメータは変更せず、式を適用できます。
9つの計数ゾーン(各計数ゾーンの液量は0.1μL)があり、各ゾーンの大きさは3mm×3mm、深さは100μmです。グリッド線の幅は15μm(±1μm)です。